Preparação das amostras para envio para o ABI3730

1- Diluição das PCRs:

O ABI3730 é um aparelho muito sensível. A diluição rotineira de PCRs no nosso laboratório é 1:40.  Porém é sempre recomendável fazer algum teste de diluição (Ex. 1:20, 1:40, 1:60), principalmente antes de enviar grandes quantidades de um marcador novo. Faça a diluição em H2O ultrapura (H2O MiliQ, por exemplo).
 

2- Adição do Marcador de Peso Molecular

ATENÇÃO: para corrida no ABI amostra e marcadores precisam estar misturados com formamida HI-DI (Applied Biosystems – cód 4311320).

  • Não use outro tipo de formamida.
  • Mantenha alíquotas de formamida HI-DI congeladas a -20oC.
  • Descongele apenas na hora de usar.

 

GS500-ROX ou GS500-LIZ
  Por amostra Por placa (96)
Formamida HI-DI 8,925 uL 946 uL
Padrão de Peso Molecular 0,075 uL uL
Total 9,0 uL 954 uL

 

3- Preparação da placa para injeção:

  • Distribua 9,0 uL da mistura de peso molecular/formamida por tubo ou em cada orifício da placa de 96 .
     
  • Coloque 1,0 ou  2,0 uL da PCRs diluídas por tubo ou orifício.
     
  • A placa deve ser bem vedada para evitar evaporação e protegida da luz. Depois de diluída, a placa (ou os tubos) deve ser imediatamente encaminhada ao CEGH.
     
  • Recomendamos que antes de diluir suas amostras nos avise quantas amostras serão encaminhadas e quando serão enviadas.
     
  • As amostras prontas para corrida devem ser mantidas a 4oC. NÃO CONGELE.
     
  • As amostras devem ser corridas no máximo 5 dias após a diluição.
     
  • Se for possível, as amostras devem ser encaminhadas em placas bem vedadas com selos (Adhesive PCR Film (100 sheets) -AB-0558 – Uniscience).
     
  • As placas abaixo podem ser usadas no ABI3730:
    • MicroAmp Optical 96-Well Reaction Plate – cód. N80105 – Applied Biosystems
    • AB-1100 – Thermo-ABgene
    • PCR-96M2-HS – Axygen